WINSERA 千舍細胞

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細胞接收與處理標準操作規(guī)程 (SOP)

一、 細胞收貨通用流程

1. 檢查包裝

   · 收到細胞后，立即檢查外包裝及培養(yǎng)瓶有無破損、漏液。

   · 如有任何異常，立即拍照記錄（包裝和顯微鏡下狀態(tài)），并聯(lián)系客服。

2. 顯微鏡下初步觀察

   · 用酒精棉球消毒培養(yǎng)瓶表面。

   · 無需打開瓶蓋，直接在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)、密度并檢查是否有微生物污染（如細菌、真菌）。

   · 拍照記錄不同倍數(shù)下的細胞形態(tài)和是否有污染，作為售后憑證。

3. 穩(wěn)定細胞狀態(tài)

   · 將整個培養(yǎng)瓶（瓶蓋擰緊）放入37°C、5% CO?培養(yǎng)箱中，靜置2-3小時，讓細胞從運輸應(yīng)激中恢復(fù)。

4. 處理決策

   · 靜置后，參照附帶的細胞操作指南，根據(jù)細胞密度和狀態(tài)進行傳代或凍存。

   · 隨貨資料：請核對并妥善保管細胞說明書、培養(yǎng)操作指南、細胞鑒定報告及支原體檢測報告。

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二、 常溫細胞收貨當天處理細則

一步：收貨與檢查

· 執(zhí)行一部分（通用流程） 的第1、2步。

第二步：更換培養(yǎng)基與細胞收集

· 消毒瓶身后，在超凈工作臺中打開瓶蓋。

· 更換為隨貨贈送的wan全培養(yǎng)基。

· 特別注意：如果顯微鏡下發(fā)現(xiàn)有較多細胞懸浮，需將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至無菌離心管，離心（如1200rpm, 5min）收集細胞，棄去舊培養(yǎng)基。

· 完成更換或收集后，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱繼續(xù)靜置2-3小時。

第三步：靜置后處理（根據(jù)細胞密度）

細胞密度情況 處理方案

密度 > 80% 進行傳代。推薦傳代比例1:2 至 1:3。不確定請聯(lián)系技術(shù)支持。

密度 < 80% 繼續(xù)培養(yǎng)。確保瓶蓋擰松或使用透氣瓶蓋以保證氣體交換。

懸浮細胞 需離心收集全部培養(yǎng)基中的細胞，用新鮮wan全培養(yǎng)基重懸后繼續(xù)培養(yǎng)。

大量貼壁細胞漂浮 離心收集細胞后，可嘗試在離心管中進行消化傳代（見下方特殊處理），或立即聯(lián)系技術(shù)支持。

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三、 細胞傳代操作步驟

A. 貼壁細胞傳代

1. 準備：吸棄舊培養(yǎng)基。

2. 沖洗：沿培養(yǎng)瓶側(cè)壁緩慢加入PBS等沖洗液，輕輕晃動后吸棄，去除殘留血清。

3. 消化：加入預(yù)熱的胰酶（如T25加1ml），輕輕晃動使胰酶覆蓋所有細胞。

4. 孵育：室溫消化約2分鐘（時間因細胞而異）。

5. 觀察：在顯微鏡下觀察，直至≥90% 細胞變圓、脫落。若未達到，可每30秒檢查一次。

6. 終止：當細胞充分解離后，立即加入兩倍胰酶體積的預(yù)熱的wan全培養(yǎng)基終止消化。

7. 吹打：用移液器輕輕吹打瓶壁，使細胞wan全脫落并分散成單細胞懸液。

8. 離心：將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，200 × g 離心 3-5分鐘，棄上清。

9. 重懸與接種：用少量新鮮wan全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，按適當比例稀釋后，接種到新的培養(yǎng)瓶中。

10. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱。若使用普通瓶蓋，務(wù)必旋松瓶蓋以利氣體交換。

B. 懸浮細胞傳代

1. 收集與離心：將細胞懸液全部轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 離心 5分鐘，棄上清。

2. 重懸：加入1-2ml新鮮wan全培養(yǎng)基，輕柔重懸細胞。

3. 接種：按1:2的比例將細胞懸液傳至新T25培養(yǎng)瓶，并補充總培養(yǎng)基量至5-8ml。

4. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

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四、 特殊問題處理：運輸中脫落的貼壁細胞

部分貼壁不牢的細胞在運輸中會脫落，屬正常現(xiàn)象，按以下步驟處理：

1. 收集：將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

2. 清洗：用PBS重懸細胞，再次離心（1200rpm, 3-5min）棄去PBS。

3. 消化：加入約1ml 0.25%胰酶，輕柔混勻（勿劇烈吹打），放入培養(yǎng)箱消化1-2分鐘。

4. 終止與分散：取出后輕輕吹打使細胞團分散，迅速加入3-5mlwan全培養(yǎng)基終止消化，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

5. 重懸與接種：加入5mlwan全培養(yǎng)基重懸，按比例接種到新培養(yǎng)瓶/皿中。

6. 觀察：鏡下觀察。若細胞為單顆或僅有3-5個細胞的小團，可正常培養(yǎng)，待其貼壁生長。

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五、 售后服務(wù)政策摘要

情況 處理政策 前提條件

細胞狀態(tài)差/活率低 可協(xié)商重發(fā) 收貨當天拍照記錄并聯(lián)系技術(shù)/銷售支持。

微生物污染  （細菌、真菌、霉菌） 免費重發(fā) 收貨24小時內(nèi)提供清晰照片（未開封瓶外觀及鏡下狀態(tài)）。

支原體污染 免費重發(fā) 收貨48小時內(nèi)檢測為陽性。注意：將上清凍存48小時后檢測的結(jié)果無效。

漏液 可協(xié)商重發(fā) 收貨當天拍照記錄。保留原瓶培養(yǎng)基在無菌容器中培養(yǎng)，若3天內(nèi)出現(xiàn)污染。

客戶操作失誤 （導(dǎo)致污染、狀態(tài)不佳、凍存復(fù)蘇失?。?不予免費重發(fā) -

使用非推薦外源試劑 （導(dǎo)致細胞問題） 不予免費重發(fā) -

非質(zhì)量問題細胞死亡 可申請低價重購 （原代細胞除外） 自收貨日起一個月內(nèi)。

實驗數(shù)據(jù)不理想 （非鑒定問題） 不予退/換 -