人結(jié)腸腺癌細(xì)胞LS1034培養(yǎng)說(shuō)明  

簡(jiǎn)介：LS1034是1989年從一名54歲白人男性患者的原發(fā)腫瘤活檢中分離出的一種結(jié)直腸癌細(xì)胞系，該患者被診斷為Dukes C型，中分化至低分化盲腸癌。

貨號(hào)：WS751

規(guī)格：1×10? 細(xì)胞/T25 培養(yǎng)瓶

一、細(xì)胞基本信息

- 細(xì)胞來(lái)源：盲腸

- 細(xì)胞形態(tài)：成肌細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

-傳代比例/細(xì)胞消化：1：2-1:3傳代，消化2-3分鐘，

- 倍增時(shí)間：~35h

- 細(xì)胞含量：＞1×10? 細(xì)胞/瓶

- 包裝規(guī)格：T25 培養(yǎng)瓶 / 1mL 凍存管

- 產(chǎn)品用途：僅供科研使用，不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

二、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

1. 培養(yǎng)基

RPMI1640 培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗

推薦血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培養(yǎng)條件

- 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3. 凍存與儲(chǔ)存

- 凍存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（現(xiàn)配現(xiàn)用）

- 儲(chǔ)存條件：液氮長(zhǎng)期保存

三、運(yùn)輸形式與接收處理

1. 常溫發(fā)貨（T25 瓶活細(xì)胞）

收到細(xì)胞后，先對(duì) T25 培養(yǎng)瓶瓶身進(jìn)行表面消毒；將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱靜置 2 - 3 小時(shí)；觀察細(xì)胞密度與生長(zhǎng)狀態(tài)，拍攝 2 - 3 張清晰照片反饋給銷售；細(xì)胞密度達(dá)標(biāo)即可進(jìn)行傳代，前期傳代比例建議為 1:2；待細(xì)胞再次長(zhǎng)滿后，將其中一整瓶細(xì)胞凍存為 1 支 1mL 凍存管，另一瓶繼續(xù)傳代；建議反復(fù)凍存 2 - 3 支種子細(xì)胞后，再進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，避免因突發(fā)情況導(dǎo)致細(xì)胞斷種。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用于培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶按 1:2 傳代。

2. 干冰發(fā)貨（凍存管細(xì)胞）

常規(guī)發(fā)貨為 2 支凍存管，建議復(fù)蘇 1 支、留存 1 支備用；若支復(fù)蘇失敗，嚴(yán)格按照廠家標(biāo)準(zhǔn)復(fù)蘇流程操作第二支；若兩支均復(fù)蘇失敗，請(qǐng)立即留存復(fù)蘇全過(guò)程照片，并時(shí)間通知銷售處理。

四、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1.凍存細(xì)胞復(fù)蘇

- 將 1mL 細(xì)胞懸液凍存管置于 37℃水浴，快速搖晃至解凍；

- 加入含 4 - 6mL 培養(yǎng)基的離心管中輕柔混勻；

- 1000RPM 離心 3 - 5 分鐘，棄去上清液；

- 用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至含 6 - 8mL 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶/皿；

- 37℃培養(yǎng)過(guò)夜，次日在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與密度。

2.對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：（細(xì)胞密度 80% - 90% 可傳代）

- 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 - 2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

- 輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3 - 5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2 - 1:5 的比例進(jìn)行。

3.對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

- 注：次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自行決定。

- 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4.細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

五、生物安全注意事項(xiàng)

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為具有潛在生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，做好個(gè)人防護(hù)；所有廢液及接觸過(guò)細(xì)胞的器皿，需經(jīng)滅菌處理后方可丟棄。

2. 復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)，務(wù)必佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服及防護(hù)面罩；凍存管浸沒(méi)在液氮中可能發(fā)生泄漏并灌入液氮，解凍時(shí)液氮?dú)饣讓?dǎo)致容器爆裂、瓶蓋崩飛造成人員劃傷等傷害，操作時(shí)務(wù)必謹(jǐn)慎。

人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞帶熒光素酶U251+LUC

人肺癌腺癌細(xì)胞HCC4006  

人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM-460

人胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞HTR-8/Svneo

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞SHP-77

人肺癌細(xì)胞DMS53

人口腔鱗癌細(xì)胞SCC-25 

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞ARD

人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞-永生化HCMEC

人間變性大細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞Karpas-299

人慢性髓系白血病細(xì)胞扎轉(zhuǎn)染熒光素酶K562+LUC

人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞帶熒光素酶Caki-2+LUC

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞帶熒光素酶BT474+LUC

人甲狀腺癌乳頭狀細(xì)胞帶熒光素酶Bcpap+LUC

低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞帶熒光素酶MHCC97-L+LUC

人膀胱癌細(xì)胞帶熒光素酶5637+LUC

人乳腺癌細(xì)胞帶紅色熒光MDA-MB-468+RFP

人非霍奇金淋巴瘤Karpas 422

人食管鱗癌細(xì)胞Kyse520 

人急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞KG-1A

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞U251MG/TMZ 

人B細(xì)胞淋巴瘤SU-DHL-8

皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞SK-MEL-5

人胃癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 NCI-N87+luc

人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞 CCD841 CON （暫不提供）

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+luc

人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+luc

人肺癌細(xì)胞帶紅色熒光 A549+RFP

人肺腺癌耐順鉑株帶熒光素酶A549+DDP+LUC

人肺癌細(xì)胞帶綠色熒光 A549+GFP

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SKOV3+luc  

人慢性髓系白血病細(xì)胞K562

人胚腎細(xì)胞293T

人前列腺癌細(xì)胞PC-3

人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1-A