小鼠原代卵泡膜細胞|原代細胞|培養(yǎng)說明

簡介：哺乳動物的卵巢內(nèi)卵泡的發(fā)育需要相關技術的調(diào)節(jié)才能完成。雌激素是卵巢的顆粒細胞核卵泡膜細胞在垂體促性腺激素的作用下協(xié)同合成的，卵泡膜細胞合成的雄激素通過基膜進入顆粒細胞，并轉變?yōu)榇萍に?，因此，卵泡膜細胞在生殖?nèi)分泌調(diào)節(jié)中占有關鍵的位置。

貨號：WS-T122

規(guī)格：1×10? 細胞/T25 培養(yǎng)瓶

細胞檢測：3β-羥基類固醇脫氫酶（3β-HSD）免疫熒光染色為陽性免疫熒光鑒定，細胞純度可達90%以上，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

一、細胞基本信息

- 細胞來源：正常卵巢組織

- 細胞形態(tài)：梭形細胞樣，不規(guī)則細胞樣，貼壁生長

-傳代比例/細胞消化：1:2傳代，消化2-3分鐘。

- 倍增時間：每周2-3次

- 細胞含量：＞1×10? 細胞/瓶

- 包裝規(guī)格：T25 培養(yǎng)瓶 / 1mL 凍存管

- 產(chǎn)品用途：僅供科研使用，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

二、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

1. 培養(yǎng)基

基礎培養(yǎng)基500ml；生長添加劑5ml；胎牛血清50ml；雙抗5ml

推薦血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培養(yǎng)條件

- 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3. 凍存與儲存

- 凍存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（現(xiàn)配現(xiàn)用）

- 儲存條件：液氮長期保存

三、運輸形式與接收處理

1. 常溫發(fā)貨（T25 瓶活細胞）

收到細胞后，先對 T25 培養(yǎng)瓶瓶身進行表面消毒；將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱靜置 2 - 3 小時；觀察細胞密度與生長狀態(tài)，拍攝 2 - 3 張清晰照片反饋給銷售；細胞密度達標即可進行傳代，前期傳代比例建議為 1:2；待細胞再次長滿后，將其中一整瓶細胞凍存為 1 支 1mL 凍存管，另一瓶繼續(xù)傳代；建議反復凍存 2 - 3 支種子細胞后，再進行擴增實驗，避免因突發(fā)情況導致細胞斷種。

備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用于培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶按 1:2 傳代。

2. 干冰發(fā)貨（凍存管細胞）

常規(guī)發(fā)貨為 2 支凍存管，建議復蘇 1 支、留存 1 支備用；若支復蘇失敗，嚴格按照廠家標準復蘇流程操作第二支；若兩支均復蘇失敗，請立即留存復蘇全過程照片，并時間通知銷售處理。

四、細胞培養(yǎng)步驟

1.凍存細胞復蘇

- 將 1mL 細胞懸液凍存管置于 37℃水浴，快速搖晃至解凍；

- 加入含 4 - 6mL 培養(yǎng)基的離心管中輕柔混勻；

- 1000RPM 離心 3 - 5 分鐘，棄去上清液；

- 用培養(yǎng)基重懸細胞，接種至含 6 - 8mL 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶/皿；

- 37℃培養(yǎng)過夜，次日在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)與密度。

2.對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：（細胞密度 80% - 90% 可傳代）

- 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 - 2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。

- 輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3 - 5min，棄去上清液，補加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 - 1:5 的比例進行。

3.對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

- 注：次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自行決定。

- 方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4.細胞凍存：收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

五、生物安全注意事項

1. 所有動物細胞均視為具有潛在生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，做好個人防護；所有廢液及接觸過細胞的器皿，需經(jīng)滅菌處理后方可丟棄。

2. 復蘇凍存細胞時，務必佩戴防護手套、防護服及防護面罩；凍存管浸沒在液氮中可能發(fā)生泄漏并灌入液氮，解凍時液氮氣化易導致容器爆裂、瓶蓋崩飛造成人員劃傷等傷害，操作時務必謹慎。

小鼠 WS-T143 小鼠原代胰腺成纖維細胞

小鼠 WS-T122 小鼠原代卵泡膜細胞

小鼠 WS-T1078 小鼠原代胰腺腺泡上皮細胞

小鼠 WS-T1064 小鼠原代聲帶成纖維細胞

小鼠 WS-T1059 小鼠原代小梁網(wǎng)細胞

小鼠 WS-T1056 小鼠原代股骨頭微血管內(nèi)皮細胞

小鼠 WS-T1048 小鼠原代胰腺導管上皮細胞

小鼠 WS-T1036 小鼠原代心房心肌細胞

小鼠 WS-T1024 小鼠原代腎盂輸尿管連接處cajal間質細胞

小鼠 S-T1009 小鼠原代骨骼干細胞

小鼠 WS-S13893 小鼠原代心臟微血管周細胞

小鼠 WS-S13884 小鼠原代嗅球神經(jīng)元細胞

小鼠 WS-S13881 小鼠原代嗅球神經(jīng)干細胞

小鼠 WS-S13879 小鼠原代海馬神經(jīng)干細胞 

小鼠 WS-S13877 小鼠原代視網(wǎng)膜小膠質細胞

小鼠 WS-S13871 小鼠原代視網(wǎng)膜前體細胞

小鼠 WS-Q1489 小鼠原代脊髓星形膠質細胞

小鼠 WS-Q1473 小鼠原代淚道上皮細胞

小鼠 WS-Q1462 小鼠原代膈肌細胞

小鼠 WS-Q1457 小鼠原代三叉神經(jīng)星形膠質細胞

小鼠 WS-Q1453 小鼠原代三叉神經(jīng)元細胞

小鼠 WS-Q1449 小鼠原代眼外肌成纖維細胞

小鼠 WS-Q1446 小鼠原代氣管成纖維細胞

小鼠 WS-Q1440 小鼠原代腎成纖維細胞

小鼠 WS-Q1427 小鼠原代腸神經(jīng)膠質細胞

小鼠 WS-Q1425 小鼠原代中耳上皮細胞

小鼠 WS-Q1418 小鼠原代牙齦干細胞

小鼠 WS-Q1414 小鼠原代牙齦成纖維細胞

小鼠 WS-S1402 小鼠原代海綿體內(nèi)皮細胞

小鼠 WS-S1293 小鼠原代胃cajal間質細胞

小鼠 WS-S1287 小鼠原代腸系膜動脈內(nèi)皮細胞

小鼠 WS-S1280 小鼠原代腹膜內(nèi)皮細胞

小鼠 WS-S1261 小鼠原代頜骨骨髓間充質干細胞

小鼠 WS-Q2023 小鼠原代鼓膜上皮細胞

小鼠 WS-Q2020 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質細胞

小鼠 WS-Q2016 小鼠原代睫狀肌細胞

小鼠 WS-Q2012 小鼠原代嗅鞘細胞